sugar 色谱柱

寡多糖色谱柱

尺寸排阻色谱法（SEC）原理

尺寸排阻色谱法（SEC）是根据样品中分子量的大小进行分离纯化的，大分子量的物质由于粒径比填料的孔径大，不能进入填料腔体内部，进而被排除在外，中分子和小分子的粒径比填料的孔径小，可以顺利的进入填料的腔体内部。而大分子不能进入填料的内部，毕竟快速的从填料之间的狭缝空隙中流出，最先流出色谱柱。而小分子物质，进入填料腔体，流动的路线更长，最迟流出色谱柱。大小分子量进而得到分离。

在做多糖、糖蛋白、蛋白研究过程中，流动相多数用水配置流动相缓冲液，使用亲水柱填料分离生物大分子，将SEC命名为凝胶渗透色谱。凝胶过滤色谱可作为用以分离生物活性物质（通常等同于在多个纯化步骤中其他的色谱技术）的前处理工具，或者亦可作为获取溶质分子信息的工具，包括分子大小或形状、聚集状态、生物聚合物与其配体结合的动力学参数。在过去凝胶渗透色谱多数采用葡聚糖、琼脂糖或者聚丙烯酰胺等软凝胶作为填料，而这些填料只能用于低压制备，不能承受太大的压力。而用于分析柱上的填料，多数是硬胶填料，单分散型，粒径小，分辨率高。可以承受几兆帕和几十兆帕的压力，或更高的压力。

SEC色谱在糖分离过程的应用

高聚多糖分子部分不能进入亲水填料的孔隙，并经颗粒间的空隙流过，淋洗出来的顺序在前；中聚多糖介于大体积分子和小分子之间；低聚寡糖和单糖体积较小的分子比凝胶颗粒的孔隙小，可以进入凝胶颗粒的空隙，并在凝胶颗粒的孔隙以及颗粒之间的空隙不断进入出来扩散，速度最慢，所以是最后被淋洗出来的。根据仪器的型号，实验流动相等条件，可以计算出保留时间或洗脱体积，可以根据普鲁兰标品推测出分子量大小。分子量越大，其淋洗体积越小，保留时间越小；子量越小洗脱体积越大，保留时间越长。

BRT® SEC色谱柱是博睿糖推出的硅胶基质的体积排阻系列色谱柱，其色谱填料为单分散、高纯度、具有良好稳定性的硅胶微球。硅胶的表面键合亲水性聚合物。博睿糖采用特殊的表面修饰手段，确保了色谱柱具有良好的稳定性和批次重现性。

不同规格BRT SEC固定相的特征参数（分析柱）

固定相	SUGAR BRT-101	SUGAR BRT-103	SUGAR BRT-104	SUGAR BRT-105
材料	纳米亲水键合材料	纳米亲水键合材料	纳米亲水键合材料	纳米亲水键合材料
粒径	5µm	5µm	5µm	5µm
孔径(Å)	~ 400	~ 600	~ 800	~ 1,000
直径	4.6mm/7.8mm	4.6mm/7.8mm	4.6mm/7.8mm	4.6mm/7.8mm
长度	300mm	300mm	300mm	300mm
多糖分子量范围	1,000 - 24,000	11,000 - 280,000	48,000 - 410,000	400,000 - 5,000,000
pH稳定性	4 - 7.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)	4 - 7.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)	4 - 8.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)	4 - 7.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)
反压(psi, 以4.6mm I.D.×300mm计)	~ 700	~ 750	~ 750	~ 750
耐受压力(psi)	~3,500	~ 3,000	~ 3,000	~ 3,000
氯化钠	50mM	50mM	50mM	50mM
耐受温度(°C)	~ 80	~ 80	~ 80	~ 80

不同规格SUGAR BRT 固定相的特征参数（制备柱）

固定相	SUGAR BRT-101	SUGAR BRT-103	SUGAR BRT-104	SUGAR BRT-105
材料	纳米亲水键合材料	纳米亲水键合材料	纳米亲水键合材料	纳米亲水键合材料
粒径	10µm	10µm	10µm	10µm
孔径(Å)	~ 400	~ 600	~ 800	~ 1,000
直径	20mm	20mm	20mm	20mm
长度	250mm	250mm	250mm	250mm
蛋白分子量范围	1,000 - 24,000	11,000 - 280,000	48,000 - 410,000	60,000 - 5,000,000
pH稳定性	4 - 7.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)	4 - 7.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)	4 - 7.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)	4 - 7.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)
反压(psi, 以4.6mm I.D.×300mm计)	~ 700	~ 750	~ 750	~ 750
耐受压力(psi)	~3,500	~ 3,000	~ 3,000	~ 3,000
氯化钠	50mM	50mM	50mM	50mM
耐受温度(°C)	~ 80	~ 80	~ 80	~ 80

Biomac SEC尺寸排阻色谱柱

Biomacro SEC尺寸排阻色谱柱
产品名称	SEC100	SEC300	SEC500	SEC-WR
官能团	醇羟基
基质	聚羟基甲基丙烯酸酯
粒径	5um
孔径	100Å	300Å	500Å	100-500Å
直径	4.6mm，8.0mm，20mm，50mm
长度	150mm，250mm，300mm
耐压上限	15Mpa
温度上限	80°C
PH范围	2-12
线性范围（葡聚糖）	1000-10,000	5000-400,000	20000-3000,000	2000-3000,000
应用领域	小分子化合物，低聚合物，多糖，糖蛋白，蛋白多糖，蛋白	小分子化合物，低聚合物，多糖，糖蛋白，蛋白多糖，蛋白	高分子聚合物，多糖，糖蛋白，蛋白多糖，蛋白	低聚合物，高聚多糖，糖蛋白，蛋白多糖，蛋白

寡糖系列色谱柱

寡糖色谱柱
产品名称	BRT oligo A
官能团	多层键合官能团
基质	硅胶
粒径	8um
孔径	100Å
直径	4.6mm，8.0mm，20mm，50mm
长度	150mm，250mm，300mm
耐压上限	15Mpa
温度上限	60°C
PH范围	2-8
线性范围（葡聚糖）	180-1638
应用领域	寡糖鉴定，寡糖分离

SUGRA BRT 系列色谱柱多糖分子量校准曲线

多糖分子量测定中串联色谱柱 SUGAR BRT-105-103-101 (4.6mm I.D. x 250 mm)

多糖分子量测定中串联色谱柱 SUGAR BRT-105-103-101 (8.0 mm I.D. x 300 mm)

多糖分子量测定中串联色谱柱 SUGAR BRT-105-103-101 (8.0 mm I.D. x 300 mm)

多糖分子量测定中3根串联色谱柱 Biomac SEC (8.0 mm I.D. x 300 mm)x3

多糖分子量测定中2根串联色谱柱 Biomac SEC (8.0 mm I.D. x 300 mm)x2

寡糖分析色谱柱 BRT-oligo-A (8.0 mm I.D.x 300 mm)

1mL/min，流动相：水，示差检测器

BRT® SEC色谱柱使用注意事项：

分子量

可根据目标物的分子量，来选择合适规格的色谱柱。

样品与流动相

为避免色谱柱堵塞，所有样品和溶剂，包括缓冲盐，都必须在使用前用0.22μm滤膜过滤。BRT^®SEC可以使用水或有机溶剂与水的混合物，与大多数缓冲盐溶液也兼容。流动相使用前需脱气，否则可能出现柱压和基线波动较大。这时可用较大流速冲洗色谱柱2-5min，如对于8mm*300mm的色谱柱，可用1.5mL/min的流速。

离子强度

色谱柱中不可避免会存在其他次级作用力，为了最大限度降低填料与被测物的次级作用力，必须调整流动相的离子强度。NaCl是SEC分离中比较常用的盐，可通过调整离子强度，减少次级作用力，进而改善峰形和分离效果。

流动相的pH调整，更多也是为了减少色谱柱中的次级作用对被测物的影响，所以测定过程中需选择合适的pH。为获得最佳分离效果和延长使用寿命，建议使用pH在4-7.5范围内的流动相。

压力

尽管BRT^®SEC可在高至30Mpa 的压力下使用，但正常的操作压力应当低于15Mpa。长时间在高压下运行会损坏色谱柱和输液泵。由于压力来源于流速，因此最大流速将受制于系统所能承受的压力。一般而言，柱压会随着色谱柱使用时间的增加而逐渐增加。

流速

尽量采用低流速测试，可以提高分离度，进而获得更好的测试效果。内径为4.6mm和8mm的色谱柱，一般建议其正常操作流速分别为0.1-0.4mL/min和0.1-1.5mL/min。

柱长

通过增加色谱柱的长度可以改善SEC分离度，所以在分离过程中，在一根色谱柱达不到分离效果时，可以考虑两根或三根色谱柱串联，甚至不同孔径的色谱柱串联（注：一般大孔径的在前，小孔径的在后）。这种条件下通常也会造成出峰时间延后，及系统压力增加。

柱温

最高操作温度为80℃。为了获得最长的使用时间，最佳操作温度为10-40℃。长时间在高温（>80℃）下操作也会损坏色谱柱，这种情形在高的 pH（>7.5）条件下尤其突出。

日常维护

随着使用次数的增加，某些样品可能吸附到入口筛板或填料上。当积累到一定程度时会出现压力升高，并伴随峰形异常等现象。因此，日常使用过程中需要经常注意对色谱柱进行冲洗和维护，以达到最佳的分离效果和延长使用寿命，定期更换保护柱和在线过滤器。

保存

如果长时间不使用，用超纯水作为流动相，将柱子中的氯化钠置换出来，1ml/min冲洗1h，然后用100%乙腈作为流动相，1ml/min冲洗1h，然后封口保存。当再次使用时，顺序流动相置换顺序相反。乙腈的目的是防止色谱柱滋生细菌，延长色谱柱使用寿命。

BRT® SEC色谱柱使用案例：

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[4] T. Guo, Y. Yang, M. Gao, Y. Qu, X. Guo, Y. Liu, X. Cui, C. Wang, Lepidium meyenii Walpers polysaccharide and its cationic derivative re-educate tumor-associated macrophages for synergistic tumor immunotherapy, Carbohydr Polym 250 (2020) 116904.

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