应用：广泛应用于寡糖和多糖的结构测定。

原理：该过程包括将多糖的单个组分糖衍生成部分甲基化的糖醇乙酸酯，并通过气相色谱-质谱联用分析和定量。

即：多糖样品中所有游离羟基都被甲基化---甲基化的多糖用三氟乙酸水解---部分甲基化的单糖被NaBH4还原---乙酰化成PMAAs---通过正确识别部分甲基化的糖醇乙酸酯，可以确定每个组成糖的连接位置。

重点及难点：

  虽然这些方法已经很好地建立起来了，但是这个过程有许多技术方面的问题，要想成功地进行甲基化分析并正确地解释所生成的数据，需要对细节的仔细关注和丰富的经验。博睿糖生物在甲基化方面，已开发出了甲基化试剂盒，专供各种多糖使用。制备了全套甲基化试剂标准品，并开发出了博睿糖寡多糖甲基化糖苷键分析软件，获得计算机软件著作权。针对中性糖、酸性糖以及氨基糖，均有一套完整、快速、精准的甲基化操作和分析流程。

项目方案：

中性糖和酸性糖甲基化方案不同，所以甲基化项目开始之前，需要客户明确样品是否为中性糖或酸性糖（明确方法可参考单糖组成分析项目）。中性糖甲基化分析：指的是单糖组成分析不含有半乳糖醛酸，葡萄糖醛酸，甘露糖醛酸，古罗糖醛酸的多糖。酸性糖甲基化分析：单糖组成分析中半乳糖醛酸，葡萄糖醛酸，甘露糖醛酸，古罗糖醛酸总和大于10%的多糖。客户需要提前告知是中性糖还是酸性糖。

方案一：

博睿糖甲基化试剂盒（货号BRS050）。客户根据说明书，可自行制备样品。简化甲基化实验试剂的复杂处理。

 方案二：

博睿糖数据库一次性比对服务。客户可将已经采集到的GCMS数据，与我公司的标准品数据图库进行比对分析，快速确定糖苷键种类，准确度完胜国外公共数据库。

 方案三：

博睿糖甲基化技术服务。客户可将样品委托我司，进行甲基化实验及分析，根据客户提供的单糖数据进行核对。给出糖苷键种类及比例。

方案四：

在甲基化之前需要进行糖醛酸还原实验，工作量比是中性糖甲基化的2倍，由于含有大量的糖醛酸会影响甲基化试剂的亲核取代反应。一般采用博睿糖生物的糖醛酸还原仪进行糖醛酸还原2-3周，最后离子色谱糖醛酸含量消失或者小于5%。均可以直接进行甲基化分析。根据客户提供的单糖数据进行核对。给出糖苷键种类及比例。

用量：

中性糖甲基化方案：需要样品量20-30mg冻干粉。

酸性糖甲基化方案：需要样品量100-150mg冻干粉。

案例分析：

  多糖甲基化是解析单糖连接位置，也是最经典的多糖高级结构的分析方法。博睿糖生物采用博睿糖甲基化试剂盒，通过甲基化反应，游离羟基被甲基化后水解单糖残基，将水解单糖的剩余羟基乙酰化。通过气相质谱，根据博睿糖甲基化数据库，结合NMR，分析单糖的位置和比例不同，推测此连接和重复结构。